淋巴細(xì)胞分離液的分離原理：淋巴細(xì)胞的方便來源是外周血，分離的原則是收率較高，純度較好，失活較低，根據(jù)不同試驗(yàn)有相對純度，無論采用哪種方法，應(yīng)盡zui大可能保持細(xì)胞應(yīng)有活性。分離的技術(shù)可根據(jù)細(xì)胞的物理性狀和表面標(biāo)志設(shè)計(jì)，根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康目刹捎妹芏忍荻入x心法、吸附分離法和其它特殊分離法。此次實(shí)驗(yàn)采用的1就是密度梯度離心法。其原理是：人外周血中各種細(xì)胞的密度不同，人紅細(xì)胞密度為1.093，粒細(xì)胞為1.092，淋巴細(xì)胞為1.074±0.001。密度梯度離心法的原理主要根據(jù)各類血細(xì)胞比重的差異，利用比重介于某兩類細(xì)胞之間的細(xì)胞分離液對血液離心，使一定比重的血細(xì)胞依相應(yīng)的密度梯度分布于不同的獨(dú)立帶，從而達(dá)到分離的目的。

   

淋巴細(xì)胞分離液的分離方法：

    1．采靜脈血2ml加入肝素抗凝管（或枸櫞酸鈉），3ml加入普通管。

    2．普通管斜面放置30MIN，此時可分離淋巴細(xì)胞。用竹簽將血塊輕輕剝離管壁（主張用玻璃棒），2000rPm離心20分鐘，用毛細(xì)吸管吸取上清（血清）于血清收集管中，于4℃冰箱保存?zhèn)溆茫糜谝院蟮腅LISA實(shí)驗(yàn)，對流免疫電泳實(shí)驗(yàn)和傷寒試管凝集實(shí)驗(yàn)，溶血反應(yīng)，免疫比濁測定補(bǔ)體C3或C4等等。（剝離時也可用毛細(xì)吸管輕輕剝離）

    3．趁普通管放置30MIN時，將裝有靜脈血2ml加入肝素抗凝管（或枸櫞酸鈉）輕輕搖動使血液與抗凝劑混勻，出現(xiàn)凝集不能繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。5min后加入Hank's 液2ml，手動輕輕搖勻。

    4．用毛細(xì)吸管吸取抗凝血，將抗凝血全部沿管壁緩慢加至另一含2ml淋巴細(xì)胞分離液  液面上，注意保持兩種液體界面清晰。

    5．將試管平衡后置水平式離心機(jī)，2000rpm離心10min。

    6．用毛細(xì)吸管仔細(xì)吸取血漿與分層液界面處淋巴細(xì)胞層至一刻度離心管內(nèi)。

    7．加入Hank's 液5ml，手動旋轉(zhuǎn)試管使液體混勻，2000rpm離心10min，棄上清，沉淀即主要為淋巴細(xì)胞（或單位個核細(xì)胞）。 備注：如做淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化或其它培養(yǎng)，所用試劑、器材應(yīng)是無菌的。Hank's 液為緩沖等滲液，類似營養(yǎng)液，保持細(xì)胞活性及完整性，可抵抗輕微的酸堿變化。