新一代測序工作流程包括三個基本步驟：文庫制備、測序和數(shù)據(jù)分析。了解每一步驟的基本知識以及如何規(guī)劃您的NGS工作流程。

NGS工作流程的準備工作

大多數(shù)NGS工作流程都需要在提取后進行QC步驟。我們推薦使用紫外分光光度法來評估純度，使用熒光分析法進行核酸定量。

NGS工作流程的第1步：文庫制備

為了節(jié)省資源，可以將多個文庫混合在一起，在同一運行中進行測序——該過程稱為多重分析。接頭連接過程中，標簽序列（或說“條形碼”）會添加到每個文庫。這些條形碼可以在數(shù)據(jù)分析過程中區(qū)分文庫。

NGS工作流程的第2步：測序

在邊合成邊測序（SBS）過程中，化學修飾的核苷酸會通過天然的互補性與DNA模板鏈結合。每個核苷酸都有一個熒光標記和一個可逆終止子，后者可以阻止下一個堿基的摻入。熒光信號可以指示出加入的核苷酸種類，終止子被切割后，下一個堿基才可以繼續(xù)結合。

NGS工作流程的第3步：數(shù)據(jù)分析

如今，您可以使用直觀的數(shù)據(jù)分析應用程序來分析NGS數(shù)據(jù)，無需進行生物信息學培訓或另外雇傭實驗室人員。這些工具可以進行序列比對、變異檢出、數(shù)據(jù)可視化或解讀。